Serological survey of Neospora caninum and Toxoplasma gondii in shelter-housed cats infected with feline immunodeficiency virus, Brazil / Inquérito sorológico para Neospora caninum e Toxoplasma gondii em um abrigo de gatos infectados com o vírus da imunodeficiência felina, Brasil

Felines play a leading role in the epidemiology of Toxoplasma gondii infection, but there is scarce information about the epidemiology of Neospora caninum, particularly in feline immunodeficiency virus (FIV)-infected cats. Cats seropositive to T. gondii do not usually show symptoms unless they are immunosuppressed, such as FIV-infected cats. The same relationship remains poorly known for N. caninum, although it has been associated with neurological disorders in HIV-infected people. Since FIV-infected cats are prone to develop encephalitis of unknown etiology, this study aimed to evaluate the presence of specific antibodies to T. gondii and N. caninum in a shelter for stray cats naturally infected with FIV. A total of 104 serum samples from cats living in a shelter, located in São Paulo city (Brazil), was assessed for T. gondii and N. caninum specific antibody by indirect fluorescent-antibody test (IFAT). Of the 104 cats, 25 (24%) were infected with FIV and, aside from these, 8 (32%) had antibodies against T. gondii (titers from 16 to 128). Only 1 (4%) of the FIV-infected cats had antibodies against N. caninum, which was the first record of coinfection. Among the FIV-naïve cats, 11 (14%) were positive for T. gondii(titers from 16 to 256) and only 1 (1.2%) had antibodies against N. caninum. Serologically positive reactions to T. gondii and N. caninum were not correlated with age or sex (p>0.05), and there was no correlation between FIV and the occurrence of anti-T. gondii or anti-N. caninum antibodies (p>0.05). Further studies encompassing larger cat populations from different origins and locations are essential to clarify the prevalence of T. gondii and N. caninum antibodies in FIV-positive cats.(AU)

Os felinos têm um papel importante na epidemiologia da infecção por Toxoplasma gondii, mas pouco se sabe sobre a epidemiologia da infecção por Neospora caninum em gatos, particularmente em gatos infectados com o vírus da imunodeficiência felina (FIV). Gatos soropositivos para Toxoplasma gondii geralmente não apresentam sintomas a não ser que estejam imunossuprimidos, como gatos infectados com FIV. A mesma relação ainda é pouco conhecida para N. caninum, embora tenha sido associada a distúrbios neurológicos em pessoas infectadas pelo HIV. Considerando que gatos infectados com FIV são propensos a desenvolver encefalite de etiologia desconhecida, o presente estudo teve como objetivo avaliar a presença de anticorpos específicos para T. gondii e N. caninum em gatos infectados com FIV. Um total de 104 amostras de soro de gatos residentes em um abrigo na cidade de São Paulo, Brasil, foram avaliadas para a presença de anticorpos contra T. gondii e N. caninum pelo teste de imunofluorescência indireta (RIFI). Dos 104 gatos, 25 (24%) estavam infectados com FIV e destes 8, (32%) tinham anticorpos contra T. gondii (titulação entre 16 e 128). Apenas 1 (4%) dos gatos infectados com FIV apresentava anticorpos contra N. caninum, sendo este o primeiro registro dessa coinfecção. Entre os gatos não infectados com FIV, 11 (14%) foram positivos para T. gondii (titulação entre 16 e 256) e apenas 1 (1,2%) tinha anticorpos contra N. caninum. A reação sorologicamente positiva para T. gondii e N. caninum não foi correlacionada com a idade ou sexo (p> 0,05), nem houve correlação entre FIV e ocorrência de anticorpos para T. gondii ou N. caninum(p> 0,05). Estudos subsequentes abrangendo populações maiores de gatos de diferentes origens e locais são essenciais para esclarecer a prevalência de anticorpos contra T. gondii e N. caninum em animais acometidos por FIV.(AU)

Comparison between Enzyme Immunoassays Performed on Samples of Dried Blood and Serum for Toxoplasmosis Prenatal Screening: Population-based Study / Comparação entre ensaios imunoenzimáticos realizados em amostras de sangue seco e soro para triagem prénatal da toxoplasmose: Estudo populacional

Abstract Objective Most prenatal screening programs for toxoplasmosis use immunoassays in serum samples of pregnant women. Few studies assess the accuracy of screening tests in dried blood spots, which are of easy collection, storage, and transportation. The goals of the present study are to determine the performance and evaluate the agreement between an immunoassay of dried blood spots and a reference test in the serum of pregnant women from a population-based prenatal screening program for toxoplasmosis in Brazil. Methods A cross-sectional study was performed to compare the immunoassays Imunoscreen Toxoplasmose IgM and Imunoscreen Toxoplasmose IgG (Mbiolog Diagnósticos, Ltda., Contagem, Minas Gerais, Brazil)in dried blood spots with the enzymelinked fluorescent assay (ELFA, BioMérieux S.A., Lyon, France) reference standard in the serum of pregnant women from Minas Gerais Congenital Toxoplasmosis Control Program. Results The dried blood spot test was able to discriminate positive and negative results of pregnant women when comparedwith the reference test, with an accuracy of 98.2% for immunoglobulin G (IgG), and of 95.8% for immunoglobulin M (IgM). Conclusion Dried blood samples are easy to collect, store, and transport, and they have a good performance,making this a promisingmethod for prenatal toxoplasmosis screening programs in countries with continental dimensions, limited resources, and a high prevalence of toxoplasmosis, as is the case of Brazil.

Resumo Objetivo A maioria dos programas de triagem pré-natal para toxoplasmose utiliza imunoensaios em amostras de soro de gestantes. Poucos estudos avaliam a acurácia dos testes de triagem em amostras de sangue seco, que são de fácil coleta, armazenamento e transporte. Este estudo teve como objetivo determinar o desempenho e avaliar a concordância entre um imunoensaio em sangue seco e um teste de referência em soro de gestantes de um programa de rastreamento pré-natal de base populacional para toxoplasmose no Brasil. Métodos Realizou-se um estudo transversal para comparar os imunoensaios Imunoscreen Toxoplasmose IgM e Imunoscreen Toxoplasmose IgG (Mbiolog Diagnósticos, Ltda., Contagem, Minas Gerais, Brazil) em sangue seco com o padrão de referência ensaio fluorescente ligado a enzimas (enzyme-linked fluorescent assay, ELFA, BioMérieux S.A., Lion, França) no soro de gestantes do Programa de Controle de Toxoplasmose Congênita de Minas Gerais. Resultados O exame em sangue seco foi capaz de discriminar os resultados positivos e negativos das gestantes quando comparado ao teste de referência, com acurácia de 98,2% para imunoglobulina G (IgG), e de 95,8% para imunoglobulina M (IgM). Conclusão O sangue seco apresenta bom desempenho e é uma amostra de fácil coleta, armazenamento e transporte, o que o torna um método promissor para programas de triagem pré-natal de toxoplasmose em países com dimensões continentais, recursos limitados, e alta prevalência de toxoplasmose, como é o caso do Brasil.

Validation of ELISA with recombinant antigens in serological diagnosis of canine Leishmania infantum infection

BACKGROUND Dogs are the main peridomiciliary reservoir of Leishmania infantum thus the correct diagnosis of infection is essential for the control of the transmission and treatment as well. However, the diagnosis is based on serological assays that are not fully effective. OBJECTIVE We aimed to establish an effective serological assay for the diagnosis of L. infantum infected dogs using Leishmania-derived recombinant antigens. METHODS Leishmania derived rK39-, rK28-, rKR95-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was standardized using symptomatic and asymptomatic L. infantum-infected dogs. Then 2,530 samples from inquiry in endemic areas for VL were evaluated and the results compared with recommended assays by the Brazilian Ministry of Health (MH algorithm). Further samples from a cohort of 30 dogs were searched. FINDINGS For rK39-, rK28- and rKR95-ELISA the sensitivity was around 97% and specificity 100%. The positivity of these three ELISA in the inquiry samples was 27-28%, around 10% higher than the assays currently in use. When cohort samples were searched, we observed likely false-negative results (> 65%) with supposedly negative samples that turned positive six months later with the assays in use (MH algorithm). MAIN CONCLUSIONS For the diagnosis of L. infantum-infected dogs, rK39-based ELISA showed better diagnostic performance than other assays in use in Brazil and worldwide.

Neospora caninum infection in cattle in the state of Amazonas, Brazil: seroprevalence, spatial distribution and risk factors / Infecção por Neospora caninum em bovinos no estado do Amazonas, Brasil: soroprevalência, distribuição espacial e fatores de risco

Abstract Livestock in the Amazon has grown significantly and, although neosporosis in cattle has been reported worldwide, there is no information about N. caninum in production systems in the state of Amazonas. The objective of this study was to determine the prevalence of anti-Neospora caninum antibodies in cattle, their spatial distribution and the risk factors associated with N. caninum infection in the state of Amazonas. Questionnaires were applied to farmers to assess risk factors associated with N. caninum infection. Blood samples were collected from 1,073 animals on 47 farms in 33 municipalities in the four Amazonian subpopulations. IgG anti-N.caninum antibodies were detected by the indirect fluorescence test, with a general prevalence of 30.2%, being seropositive in 43 farms (91.5%), with prevalence ranging from 2.2% to 69.2%. The highest number of high density points was found in subpopulation 3 (municipality of Apuí and other municipalities on the Madeira River and affluent). It was concluded that N. caninum is present with high seroprevalence values, when compared to other cattle producing states in the Amazon region of Brazil. The identified factors can be used as risk indicators so that control measures can be implemented to prevent infection by N. caninum in these herds.

Resumo A pecuária na Amazônia tem crescido significativamente e, embora a neosporose em bovinos tenha sido relatada em todo o mundo, não há informações sobre N. caninum nos sistemas de produção no estado do Amazonas. Objetivou-se determinar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos, sua distribuição espacial e os fatores de risco associados à infecção por N. caninum no estado do Amazonas. Questionários foram aplicados aos fazendeiros, para avaliar fatores de risco associados à infecção por N. caninum. Amostras de sangue foram coletadas de 1.073 animais em 47 fazendas, em 33 municípios das quatro subpopulações amazonenses. Anticorpos IgG anti-N.caninum foram detectados pelo teste de imunofluorescência indireta, com prevalência geral de 30,2%, com soropositividade em 43 fazendas (91,5%), com prevalência variando de 2,2% a 69,2%. O maior número de pontos de alta densidade foi encontrado na subpopulação 3 (município de Apuí e demais municípios do rio Madeira e afluentes). Concluiu-se que N. caninum está presente com altos valores de soroprevalência, quando comparado a outros estados produtores de gado na região amazônica do Brasil. Os fatores identificados podem ser usados como indicadores de risco, para que medidas de controle possam ser implementadas para prevenir a infecção por N. caninum nesses rebanhos.

Risk factor analysis associated with Neospora caninum in dairy cattle in Western Brazilian Amazon / Análises de fatores de risco associado a Neospora caninum em gado leiteiro na Amazônia Ocidental Brasileira

Abstract Neospora caninum is considered to be one of the main causes of abortion among cattle. The present survey was conducted in the municipality of Rolim de Moura, Rondônia State, Brazil. A questionnaire that investigates the epidemiological aspects of neosporosis was used in the analysis of risk factors associated with the animal-level and herd-level prevalence in dairy cattle. A total of 416 bovine blood samples were collected from 30 farms, and N. caninum antibody levels were measured by Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT). Analysis of dairy cattle serum samples revealed the presence of anti-N. caninum antibodies to be 47.36% (n = 197). Risk factors associated with N. caninum infection were the management system and access locations of dogs. The results of the present survey indicated that infection of dairy cattle with N. caninum is widespread in the studied region of Western Amazon, which has implications for prevention and control of neosporosis in this region. Therefore, integrated control strategies and measures are recommended to prevent and control N. caninum infection in dairy cattle. In addition, direct contact between dairy cattle, dogs and wild animals, which can influence the epidemiology of neosporosis, should be investigated further.

Resumo A infecção por Neospora caninum é considerada uma das principais causas de aborto entre bovinos. Esta pesquisa foi realizada no município de Rolim de Moura, estado de Rondônia, Brasil. Um questionário que investiga os aspectos epidemiológicos da neosporose foi utilizado na análise dos fatores de risco associados à prevalência em animais e em rebanhos. Um total de 416 amostras de sangue bovino foi colhido em 30 fazendas, e os níveis de anticorpos de N. caninum foram mensurados pela reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). A análise das amostras mostrou prevalência de anticorpos contra N. caninum de 47,36% (n = 197). Os fatores de risco associados à infecção por N. caninum foram o sistema de manejo e os locais de acesso dos cães. Os resultados da presente pesquisa indicam que a infecção de bovinos leiteiros com N. caninum está disseminada na região estudada da Amazônia Ocidental, o que tem implicações para a prevenção e controle da neosporose nessa região. Portanto, estratégias e medidas de controle integrado são recomendadas para prevenir e controlar a infecção por N. caninum em gado leiteiro. Além disso, o contato íntimo entre gado leiteiro, cães e animais selvagens, pode influenciar a epidemiologia da neosporose e deve ser investigada mais detalhadamente.

Occurrence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in pigs in the State of Pará, Brazil / Ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em suínos no estado do Pará, Brasil

Abstract We investigated the occurrence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum antibodies in pigs raised in the Northeast of Pará, Brazil. At Study I, convenience sampled 151 pigs at two slaughterhouses, with and without state inspection; and Study II, which assessed 159 pigs with probabilistic sampling from nine pig farms. Serological analysis was performed using indirect fluorescent antibody test for T. gondii and N. caninum with a cutoff of 64 and 50, respectively. Overall, 6.77% pigs were seropositive for T. gondii and 5.16% for N. caninum. In Study I, pigs slaughtered with and without state inspection presented similar occurrence for both coccidia (p>0.05). Study II found an association between N. caninum seropositivity and sludge discarded into the soil, feeding pigs with animal-based protein, subsistence system, and absence of nipple drinkers. No association was found for T. gondii. Pigs from Pará are a potential source of T. gondii infection to humans. To our best knowledge, this is the first study to report anti-N. caninum antibodies in the serum of pigs in Pará State, Brazilian Amazon.

Resumo Foi investigada a ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em suínos criados no nordeste do Pará, Brasil. No Estudo I, foram amostrados 151 porcos em dois matadouros, com e sem inspeção estadual. O Estudo II avaliou 159 suínos com amostragem probabilística de nove granjas de suínos. Para sorologia, utilizou-se o teste de imunofluorescência indireta para T. gondii e N. caninum com ponto de corte de 1:64 e 1:50, respectivamente. No geral, 6,77% dos suínos foram soropositivos para T. gondii e 5,16% para N. caninum. No Estudo I, suínos abatidos em matadouros com e sem inspeção estadual apresentaram ocorrência semelhante para ambos os coccídios (p> 0,05). Os animais amostrados de Belém, Benevides, Marituba, Bujaru, Castanhal e Igarapé-Miri foram positivos para T. gondii, enquanto os soropositivos para N. caninum foram encontrados em Belém, Bujaru, Castanhal e Santo Antônio do Tauá. O Estudo II encontrou associação entre soropositividade de N. caninum e esterco descartado no solo, alimentação dos suínos com proteína de origem animal, criação de subsistência e ausência de bebedores tipo "nipple". Não foi encontrada associação para T. gondii. A carne suína apresenta potencial risco de transmissão de T. gondii para os habitantes da região. De acordo com nosso conhecimento, este é o primeiro relato de anticorpos anti-N. caninum em suínos no estado do Pará, Amazônia brasileira.

Spatial analysis of canine leishmaniasis in an area of transmission of the semi-arid region of the State of Paraíba, Brazil / Análise espacial da leishmaniose canina em uma área de transmissão do semiárido paraíbano, Brasil

Abstract Visceral leishmaniasis is a widely distributed zoonosis and canine infection is an important indicator of risk for the occurrence of the disease in humans. The goal of this analysis was to study the spatial clustering of canine leishmaniasis (CL) in the municipality of Santa Luzia, state of Paraíba. For this, 749 samples of canine plasma were tested using three serological tests. The dog was considered positive if it reacted in two serological tests. The location of the residences was performed with a Global Positioning System receiver (GPS Garmin® eTrex 30), and used to perform georeferencing and spatial analysis. The prevalence of CL was 15.49% and it was observed that most cases of the urban area were concentrated in the Frei Damião neighborhood, on the outskirts of the city, where a high-risk cluster for the occurrence of the disease was formed (p = 0.02; RR = 2.48). No statistically significant cluster was observed in rural areas. CL is widely distributed in the municipality of Santa Luzia in a heterogeneous manner and with a tendency to urbanization. The areas identified with high prevalence and highest risk should be prioritized to maximize the efficiency of the Visceral Leishmaniasis Surveillance and Control Program and minimize the chance of new canine and human cases.

Resumo A leishmaniose visceral é uma zoonose amplamente distribuída, e a infecção canina é um importante indicador de risco para a ocorrência da doença em humanos. O objetivo foi estudar o comportamento espacial da leishmaniose canina (LC) no município de Santa Luzia, estado da Paraíba. Para tal, 749 amostras de plasma canino foram testadas por meio de três técnicas sorológicas. O cão seria considerado positivo se apresentasse duas sorologias reagentes. A localização das residências foi realizado pelo receptor de Sistema de Posicionamento Global (GPS Garmin® eTrex 30) e usado para a realização do georreferenciamento e análise espacial. A prevalência da LC foi de 15,49% e observou-se que a maioria dos casos de LC da zona urbana estava concentrada no bairro Frei Damião, localizado na periferia da cidade, onde se formou um cluster de alto risco para ocorrência da doença (p = 0,02; RR = 2,48). Nenhum cluster estatisticamente significativo foi observado na zona rural. A LC está amplamente distribuída no município de Santa Luzia, porém de forma heterogênea e com tendência à urbanização. As áreas identificadas com intensa prevalência e maior risco devem ser priorizadas para maximizar a eficiência do Programa de Vigilância e Controle da Leishmaniose Visceral e minimizar a chance de novos casos caninos e humanos.

Seroepidemiology of Toxoplasma gondii in domestic cattle, sheep, goats and pigs from São Tomé and Príncipe / Soroepidemiologia de Toxoplasma gondii em bovinos, ovinos, caprinos e suínos domésticos de São Tomé e Príncipe

Abstract Despite the global importance of the zoonotic parasite Toxoplasma gondii, little is known regarding its infection in the Democratic Republic of São Tomé and Príncipe (DRSTP). This is the first report of antibodies to T. gondii in cattle, sheep, goats and pigs from the DRSTP. Antibodies were assessed by the modified agglutination test (MAT), with a cut-off titer of 100 for cattle and 20 for sheep, goats and pigs. The present study revealed an overall seroprevalence of 55.8%; 27.1% in 48 cattle, 68.4% in 98 sheep, 70.1% in 97 goats and 43.7% in 103 pigs. The south geographical area for cattle, the central area for sheep, and adult age and living in the central region for goats were found to be risk factors for seropositivity to T. gondii. These results support the scenario of a considerable presence of sporulated oocysts as well as of infected intermediate hosts in the local environment. Consumption of raw or undercooked meat should be considered as an important potential source of infection for animals and humans in the DRSTP.

Resumo Apesar da importância global do parasita zoonótico Toxoplasma gondii, pouco se conhece sobre sua infecção na República Democrática de São Tomé e Príncipe (RDSTP). Esse é o primeiro relato de anticorpos para T. gondii em bovinos, ovinos, caprinos e suínos da RDSTP. Os anticorpos foram pesquisados pelo teste de aglutinação direta modificada (TADM), com um título de corte de 100 para bovinos e de 20 para ovinos, caprinos e suínos. O presente estudo revelou uma soroprevalência global de 55,8%: 27,1% em 48 bovinos, 68,4% em 98 ovinos, 70,1% em 97 caprinos e 43,7% em 103 suínos. A área geográfica sul para os bovinos, a área central para os ovinos, bem como a idade adulta e a região central para os caprinos foram considerados fatores de risco para soropositividade a T. gondii. Esses resultados suportam o cenário de uma considerável presença de oocistos esporulados, bem como de hospedeiros intermediários infectados no ambiente local. O consumo de carne crua ou mal passada deve ser considerado como uma importante fonte potencial de infecção para animais e seres humanos na RDSTP.

Toxoplasma gondii in cattle in Brazil: a review / Toxoplasma gondii em bovinos no Brasil: uma revisão

Abstract Toxoplasma gondii is an apicomplexan protozoan that is frequently found in both humans and animals worldwide. The aim of this review was to list important aspects of Toxoplasma gondii infection in cattle in Brazil. The frequency of occurrence of T. gondii antibodies in Brazilian cattle ranges from 1 to 89.1%, depending on the region evaluated, based on data from 1978 to 2018. However, some characteristics of T. gondii infection in cattle remain uncertain, such as the role of meat intake in transmitting the parasite to humans. Most information regarding T. gondii infection among Brazilian cattle is limited to evaluations of the frequency of occurrence of antibodies. About 70% of the diagnoses of infection in these ruminants in Brazil are made via the indirect fluorescence antibody test (IFAT). Nevertheless, little is known about the population structure of this protozoan in cattle. It is necessary to expand the studies on toxoplasmosis in cattle, in order to better understand T. gondii infection in these animals and its implications for Brazilian public health.

Resumo Toxoplasma gondii é um protozoário apicomplexa de distribuição mundial prevalente em seres humanos e animais. A presente revisão objetiva elencar aspectos de importância relacionados à infecção por Toxoplasma gondii em bovinos no Brasil. A soroprevalência de anticorpos anti-T. gondii em bovinos do rebanho brasileiro varia de 1 a 89,1%, a depender da região avaliada, baseando-se em dados disponíveis de 1978 a 2018. Todavia, algumas características da infecção por T. gondii na espécie ainda são incertos, como o papel da ingestão da carne bovina na transmissão do parasita ao homem. A maior parte das informações relativas à infecção no rebanho nacional restringem-se a estudos de soroprevalência. Cerca de 70% do diagnóstico da infecção nesses ruminantes no Brasil é realizado por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Contudo, o conhecimento acerca da estrutura populacional do protozoário em bovinos ainda é limitado. Assim, é necessário ampliar os estudos sobre a toxoplasmose em bovinos, tendo em vista uma melhor compreensão da infecção na espécie, bem como de suas implicações para saúde pública brasileira.

Neospora caninum in free-range chickens (Gallus gallus domesticus) from southern Brazil / Neospora caninum em galinhas de vida livre (Gallus gallus domesticus) do sul do Brasil

Abstract Neospora caninum is an obligate intracellular parasite that can infect many domestic and wild animals, including birds. These animals are important sources for monitoring of environmental contamination, as they could become infected through sporulated oocysts; however, the real role of birds in the biological cycle of N. caninum remains uncertain. This study aimed to determine the prevalence of anti-N. caninum antibodies, evaluate associated factors, detect the parasite by molecular testing of free-range chickens from Brazil, and evaluate different techniques for its serological diagnosis. Blood samples of 366 chickens from 25 farms were collected for serological assays. The indirect fluorescent antibody test (IFAT) and the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to detect anti-N. caninum antibodies. Chickens that tested seropositive by IFAT had their brain tissues and a pool of organs (heart, lung, and liver) submitted to PCR for molecular detection of the parasite. Out of 366 chickens, 65 (17.8%) and 163 (44.6%) were seropositive by IFAT and ELISA, respectively. Brain tissues (n=60) and the pools of organs (n=65) were negative in the PCR. Our results showed a high prevalence of antibodies in free-range chickens and that IFAT is the more sensitive technique for the detection of anti-N. caninum antibodies.

Resumo Neospora caninum é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar vários animais domésticos e silvestres, incluindo as aves. Esses animais são importantes fontes para o monitoramento da contaminação ambiental, uma vez que eles podem se infectar por meio da ingestão de oocistos. Porém, o real papel das aves no ciclo biológico do N. caninum ainda é incerto. Este estudo teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum, avaliar fatores associados, detectar o parasita por meio de teste molecular em galinhas de vida livre do Brasil e avaliar diferentes técnicas para o diagnóstico sorológico. Amostras de sangue de 366 galinhas de 25 fazendas foram coletadas para testes sorológicos. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) foram utilizados para detectar anticorpos anti-N. caninum. As amostras de tecidos (cérebro, coração, pulmão e fígado) de galinhas soropositivas na RIFI foram coletadas e submetidas à PCR para detecção molecular do parasita. Das 366 galinhas, 65 (17,8%) e 163 (44,6%) foram soropositivas pela RIFI e ELISA, respectivamente. Nenhuma amostra foi positiva na PCR. Esses resultados demonstram uma elevada prevalência de anticorpos em galinhas de vida livre e que a RIFI é uma técnica mais sensível para a detecção de anticorpos anti-N. caninum.

Natural Infection by Leishmania infantum in domestic cats (Felis catus) in a municipality of moderate transmission in the Brazilian semi-arid region / Infecção natural por Leishmania infantum em gatos domésticos (Felis catus) em município de transmissão moderada no semiárido brasileiro

Abstract The main clinical, anatomopathological, and molecular aspects of the infection by Leishmania infantum are described in two cats with multicentric cutaneous, nodular, and ulcerated lesions. The animals were submitted to a clinical examination, followed by serological, molecular and parasitological exams, with culture and isolation of the parasite, and subsequent isoenzymatic characterization. The animals were euthanized and necropsied. Case 1 was an adult, female, mixed-bred stray cat. Case 2 was an adult, male, mixed-bred and domiciled cat. Both were positive for the presence of anti-L. infantum antibodies. In the cytology of the cutaneous nodules and lymph nodes, amastigote forms of Leishmania spp. could be visualized, free and in the interior of the macrophages. In the histopathology, the lesions were characterized by nodular granulomatous and/or ulcerative dermatitis, associated to amastigote forms of Leishmania spp. By means of the polymerase chain reaction, the sequence of the L. infantum kDNA minicircle was amplified. It is concluded that the infection by L. infantum occurs in cats in the State of Paraíba, Northeast region of Brazil and the need to understand the immunological profile of the visceral leishmaniasis in the feline population is highlighted with aimed at the control measures in public health.

Resumo Descrevem-se os principais aspectos clínicos, anatomopatológicos e moleculares da infecção por Leishmania infantum em dois gatos, cuja queixa era de lesões cutâneas multicêntricas, nodulares e ulceradas. Os animais foram submetidos à avaliação clínica, seguida de exames sorológicos, molecular e parasitológico, com cultura e isolamento do parasita e posterior caracterização isoenzimática. Os animais foram eutanasiados e encaminhados para a necropsia. O caso 1 era uma gata adulta, sem raça definida e errante. O caso 2 era um gato adulto, sem raça definida e domiciliado. Ambos foram positivos para a presença de anticorpos anti-L. infantum. Na citologia dos nódulos cutâneos e linfonodos, puderam ser visualizadas formas amastigotas de Leishmania spp. livres e no interior de macrófagos. Na histopatologia, as lesões se caracterizavam por dermatite granulomatosa nodular e/ou ulcerativa, associadas a formas amastigotas de Leishmania spp. Por meio da reação em cadeia da polimerase, amplificou-se a sequência do minicírculo do kDNA de L. infantum. Conclui-se que a infecção por L. infantum ocorre em gatos no estado da Paraíba, região Nordeste do Brasil. Deve-se ressaltar a necessidade de compreender o perfil imunológico e epidemiológico da leishmaniose visceral na população felina, com vistas às medidas de controle em saúde pública.

Evaluation of the performance of three serological tests for diagnosis of Leishmania infantum infection in dogs using latent class analysis / Avaliação da realização de três testes sorológicos para diagnóstico de infecção por Leishmania infantum em cães utilizando análise de classe latente

Abstract Canine leishmaniasis (CanL) is a disease caused by Leishmania infantum. Serological methods are the most common diagnostic techniques used for the diagnosis of the CanL. The objective of our study was to estimate the sensitivity and specificity of one in-house ELISA kit (ELISA UNIZAR) and three commercially available serological tests (MEGACOR Diagnostik GmbH) including an immunochromatographic rapid test (FASTest LEISH®), an immunofluorescent antibody test (MegaFLUO LEISH®) and an enzyme-linked immunosorbent assay (MegaELISA LEISH®), using latent class models in a Bayesian analysis. Two hundred fifteen serum samples were included. The highest sensitivity was achieved for FASTest LEISH® (99.38%), ELISA UNIZAR (99.37%), MegaFLUO LEISH® (99.36%) followed by MegaELISA LEISH® (98.49%). The best specificity was obtained by FASTest LEISH® (98.43%), followed by ELISA UNIZAR (97.50%), whilst MegaFLUO LEISH® and MegaELISA LEISH® obtained the lower specificity (91.94% and 91.93%, respectively). The results of present study indicate that the immunochromatographic rapid test evaluated FASTest LEISH® show similar levels of sensitivity and specificity to the quantitative commercial tests. Among quantitative serological tests, sensitivity and specificity were similar considering ELISA or IFAT techniques.

Resumo A leishmaniose canina (Lcan) é uma causada pela Leishmania infantum. Os métodos sorológicos são as técnicas diagnósticas mais utilizadas para o diagnóstico da leishmaniose canina. O objetivo do nosso estudo foi estimar a sensibilidade e a especificidade de um kit ELISA interno (ELISA UNIZAR) e de três testes sorológicos disponíveis comercialmente, feitos pelo mesmo fabricante (MEGACOR Diagnostik GmbH), incluindo um teste rápido imunocromatográfico (FASTest LEISH®), um teste de anticorpos imunofluorescentes (Megafluo LEISH®) e um ensaio de imunoabsorção enzimática (Megaelisa LEISH®), utilizando-se modelos de classe latentes numa análise bayesiana. Foram incluídas duzentas e quinze amostras de soro. A maior sensibilidade foi alcançada para Fastest LEISH® (99,38%), ELISA UNIZAR (99,37%), Megafluo LEISH® (99,36%) seguida por Megaelisa LEISH® (98,49%). A melhor especificidade foi obtida por FASTest LEISH® (98,43%), seguida por ELISA UNIZAR (97,50%), enquanto Megafluo LEISH® e Megaelisa LEISH® obtiveram a menor especificidade (91,94% e 91,93%, respectivamente). Os resultados do presente estudo indicam que o teste rápido imunocromatográfico, avaliado por FASTest LEISH® mostra níveis similares de sensibilidade e especificidade aos testes comerciais quantitativos incluídos. Entre os testes sorológicos quantitativos, a sensibilidade e a especificidade foram semelhantes, considerando-se as técnicas de ELISA ou IFI.

Cumulative incidence and spatial distribution of dogs exposed to Toxoplasma gondii / Incidência cumulativa e distribuição espacial de cães expostos a Toxoplasma gondii

Abstract Toxoplasma gondii is one of the most important protozoa parasites worldwide. Although many seroprevalence studies have been performed in domestic and wild species, data on the cumulative incidence and the spatial distribution of T. gondii in animals are extremely scarce. In the present study, dogs from Botucatu municipality, São Paulo state, were followed for one year and their blood samples were collected on three moments: days 1, 180, and 360. The sera were submitted to the immunofluorescence antibody test (IFAT) to detect IgG antibodies to T. gondii. Age and sex were compared with IFAT results through statistical tests. Spatial analysis was used to detect clusters of seropositive dogs. Among the 350 dogs that were seronegative on day 1, 53 became seropositive in subsequent samplings; thus, cumulative incidence was 15.1% exposed dogs/year. Age and sex were not associated with serological results. The spatial analysis revealed that seropositive dogs were distributed in all the studied areas, with a significant cluster in a zone with poor sanitary conditions and low socioeconomic status. T. gondii is frequent and widely distributed in the urban area of Botucatu, and impoverished areas are possibly associated with high levels of environmental contamination by this parasite.

Resumo Toxoplasma gondii é um dos parasitas mais importantes mundialmente. Embora muitos estudos de soroprevalência tenham sido realizados em espécies domésticas e selvagens, dados sobre a incidência cumulativa e distribuição espacial de T. gondii em animais são extremamente escassos. No presente estudo, cães do município de Botucatu, estado de São Paulo, foram acompanhados por um ano, e suas amostras de sangue foram colhidas em três momentos: dias 1, 180 e 360. O soro foi submetido ao teste de imunofluorescência indireta (RIFI), para detectar anticorpos IgG para T. gondii. A idade e o sexo foram comparados com os resultados da RIFI por meio de testes estatísticos. Dos 350 cães soronegativos no dia, 1,53 se tornaram soropositivos nas amostragens subsequentes; portanto, a incidência cumulativa foi de 15,1% de cães expostos/ano. A idade e o sexo não tiveram associação com os resultados da sorologia. A análise espacial demonstrou que os cães soropositivos se distribuíram em todas as áreas compreendidas pelo estudo, com uma concentração significativa em uma região com condições sanitárias precárias e baixos níveis socioeconômicos. T. gondii é frequente e amplamente distribuído na área urbana de Botucatu, e regiões empobrecidas podem estar associadas a maiores níveis de contaminação ambiental por esse parasita.

Canine leishmaniasis in the semi-arid region of Pernambuco, northeastern Brazil: epidemiology, factors associated with seropositivity and spatial analysis / Leishmaniose visceral canina na região semiárida de Pernambuco, nordeste do Brasil: epidemiologia, fatores associados à soropositividade e análise espacial

Abstract This study aimed to determine the seroprevalence, factors associated with seropositivity to Leishmania infection in dogs and spatial analysis in six municipalities in the semiarid region of Pernambuco, Brazil. Blood samples were collected from 462 dogs, 77 in each municipality, and used for serological analysis [dual path platform (DPP®) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)]. Clinical signs of dogs were evaluated and associated factors for Leishmania infection were analyzed using robust Poisson regression model. A seroprevalence of 42.8% (198/462, IC: 95% = 38.6%-47.6%) was detected in dogs that tested positive in both tests, ranging from 29.8% to 55.8%, with higher prevalence in the municipality of Cabrobó (55.8%; P = 0.006). About 67% (132/198) of the seropositive dogs showed one or more clinical signs suggestive of canine leishmaniasis (CanL), such as lymphadenomegaly, skin lesions and conjunctivitis, which were associated with seropositivity. High seroprevalence levels were identified in urban and rural areas in all the municipalities, and the buffer for sand flies around cases covered almost these entire areas. Spatial analysis revealed a significant cluster, showing a relative risk of 1.88 in the urban area of Cabrobó. The higher density of seropositive dogs in urban areas indicates the need effective control measures against CanL to prevent the emergence of canine and human diseases.

Resumo Este estudo objetivou determinar a soroprevalência, fatores associados com a soropositividade da infecção por Leishmania em cães e análise espacial em seis municípios do semiárido de Pernambuco. Amostras de sangue foram coletadas de 462 cães, 77 em cada município, e utilizadas para análise sorológica [teste rápido imunocromatográfico (DPP®) e ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA)]. Os sinais clínicos dos cães foram avaliados, e os fatores associados à infecção por Leishmania foram analisados, ​​usando-se modelo robusto de regressão de Poisson. Foi detectada uma soroprevalência de 42,8% (198/462, IC: 95% = 38,6%-47,6%) em cães com resultados positivos em ambos os testes, variando de 29,8% a 55,8%, com maior prevalência no município de Cabrobó (55,8%; P = 0,006). Cerca de 67% (132/198) dos cães apresentaram um ou mais sinais clínicos sugestivos de CanL, como linfadenomegalia, lesões de pele e conjuntivite, os quais foram associados à soropositividade. Altos níveis de soroprevalência foram identificados nas áreas urbanas e rurais de todos os municípios, e os buffers da área de vôo do flebotomíneo em torno dos casos cobriam quase todas as áreas dos municípios. A análise espacial revelou um cluster significativo, mostrando um risco relativo de 1,88 na área urbana de Cabrobó. A maior densidade de casos em áreas urbanas indica a necessidade de medidas efetivas de controle contra o CanL, para evitar o surgimento da doença canina e humana.

Serological prevalence of Toxoplasma gondii infection in cats (Belém, Pará, Brazil) / Prevalência sorológica de infecção por Toxoplasma gondii em gatos (Belém, Pará, Brasil)

Abstract We evaluated the prevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies in the serum samples collected from domestic cats in Belém, Pará, Brazil. We also correlated the presence of T. gondii antibodies with environmental variables and cat-owner habits. Four-hundred and forty-seven serum samples from domestic cats were analyzed. The sera were tested using an indirect immunofluorescence assay. Among the animals analyzed, 21.92% (98/447) were seropositive. A statistically significant association was found in relation to age and serology among the animals over 1 year old (p<0.01): in the group up to 1 year old, 12.82% (20/156) of the animals were positive, and in the group over 1 year old, 26.80% (78/291) were positive. Our results show that the cats in Belém, Pará region have anti-T. gondii antibodies, and their owners are not aware of toxoplasmosis or how to prevent its transmission.

Resumo Foi avaliada a prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em amostras de soro, coletadas de gatos domésticos, em Belém, Pará, Brasil. Também correlacionou-se a presença de anticorpos contra T. gondii com variáveis ambientais e hábitos de proprietários. Quatrocentas e quarenta e sete amostras de soro de gatos domésticos foram analisadas. Os soros foram testados por ensaio de imunofluorescência indireta, e as amostras de fezes foram analisadas por meio de reação em cadeia da polimerase. Entre os animais analisados, 21,92% (98/447) foram soropositivos. Foi encontrada associação estatística significante em relação à idade e à sorologia entre os animais acima de 1 ano (p <0,01): no grupo de até 1 ano, 12,82% (20/156) dos animais positivos e, no grupo acima de 1 ano, 26,80% (78/291) positivos. Os resultados mostram que os gatos daquela região possuem anticorpos anti-T. gondii, e seus donos não estão cientes da toxoplasmose ou de como evitar sua transmissão.

Age, gender and climate associations with the seroprevalence of Neospora species infection in horses in Jordan / Idade, sexo e associações climáticas com a soroprevalência da infecção por Neospora em cavalos da Jordânia

Abstract A cross-sectional study was carried out on a sample of 379 horses to determine the seroprevalence of Neospora spp. in Jordan using the indirect fluorescent antibody test. Five variables, namely locality (n=10), climatic zone (n=4), age group (n=3), gender, and breed were tested as risk factors for Neospora-immunoglobulin (Ig)G seropositivity at four cutoff titers (1:50, 1:200, 1:400, and 1:800) using univariate and multivariate logistic regression analyses. A total of 122 (32%; 95% CI: 28, 37) sera samples had anti-Neospora-IgG at a cutoff titer of 1:50. Increased Neospora-IgG seropositivity was found in horses in three localities (Madaba, Zarka, and Petra) and was associated with the following variables: cool temperate climate; age >14 years; and female gender. Seropositivity was found among horses from Madaba at all cutoff titers, Zarka at titers >1:200, and Petra at titers <1:200. Cool temperate climate was associated with titers <1:400. Horses aged >14 years were found to be associated with seropositivity at titers ≥1:200. Female gender was associated with high seropositivity at >1:800.

Resumo Um estudo transversal foi realizado, na Jordânia, em uma amostra de 379 cavalos, para determinar a soroprevalência de Neospora spp., usando-se o teste de anticorpos fluorescentes indiretos. Cinco variáveis: localidade (n=10), zona climática (n=4), grupo etário (n=3), sexo e raça, foram testadas como fatores de risco para soropositividade para Neospora-imunoglobulina (Ig)G, considerando-se quatro pontos de corte (1:50, 1:200, 1:400 e 1:800) por meio de análises de regressão logística univariada e multivariada. Um total de 122 (32%; 95% CI: 28, 37) amostras de soros apresentaram anti-Neospora-IgG, utilizando-se como ponto de corte o título de 1:50. Cavalos de três localidades apresentaram aumento da soropositividade para Neospora-IgG (Madaba, Zarka e Petra) o que foi associado às seguintes variáveis: clima temperado fresco; idade >14 anos; e sexo feminino. Os cavalos de Madaba apresentaram soropositividade em todos os títulos utilizados como ponto de corte; os cavalos de Zarka em títulos >1:200; e os cavalos de Petra em títulos <1:200. O clima temperado fresco foi associado aos títulos <1:400. Cavalos com idade >14 anos estiveram associados à soropositividade nos títulos ≥1:200. O sexo feminino esteve associado à alta soropositividade nos títulos >1:800.

Canine visceral leishmaniasis: perception, prevalence, and spatial distribution in municipality of Nossa Senhora do Livramento, Mato Grosso, Brazil / Leishmaniose visceral canina: percepção, prevalência e distribuição espacial em Nossa Senhora do Livramento, Mato Grosso, Brazil

Abstract The midwest region of Brazil has witnessed an increase in the number of cases of human (HVL) and canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of the present study was to evaluate the population's perception of these diseases, factors associated with CVL, its spatial distribution, and the prevalence of anti-Leishmania spp. in 385 dogs, determined using a commercially available immunochromatographic rapid test and confirmed using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Of the 385 samples, 54 were positive for CVL and confirmed by ELISA, corresponding to a prevalence of 14%. Knowledge of signs of CVL by tutors (p = 0.038); previous occurrence of CVL in the vicinity (p = 0.022); symptomatic dog(s) (p = 0.014), splenomegaly (p = 0.055), and ear ulcer(s) (p = 0.059) were significantly associated with CVL. The results revealed a significant prevalence of CVL spatially distributed in rural and urban contexts. The association between environmentally related variables and perception and the occurrence of CVL underscores the importance of implementing control and prevention strategies primarily focused on environmental management and health education activities.

Resumo No Brasil, a região Centro-Oeste tem apresentado aumento no número de casos de leishmaniose visceral humana (LVH) e canina (LVC). Com isso, o objetivo deste estudo foi avaliar a percepção da população em relação à doença, aos fatores associados a LVC, à distribuição espacial e à prevalência de anticorpos anti-Leishmania spp. em 385 cães, a partir do teste rápido imunocromatográfico e ensaio imunoenzimático (ELISA). Das 385 amostras, 54 foram reagentes para LVC e confirmadas no ELISA, correspondendo a prevalência de 14%. O conhecimento dos sinais da LVC pelos tutores (p = 0,038), a ocorrência prévia da LVC na vizinhança (p = 0,022), o cão sintomático (p = 0,014), esplenomegalia (p = 0,055) e apresentar úlcera em ponta de orelha (p = 0,059) foram significativamente associados à LVC. Os resultados demonstram expressiva prevalência de LVC, distribuídas espacialmente no contexto rural e urbano, e a associação de variáveis relacionadas ao ambiente e à percepção com a ocorrência da LVC ressaltam a importância da implementação de estratégias de controle e prevenção, focadas principalmente no manejo ambiental e em atividades de educação em saúde.

Serological study of feline leishmaniasis and molecular detection of Leishmania infantum and Leishmania braziliensis in cats (Felis catus) / Pesquisa sorológica da leishmaniose felina e detecção molecular de Leishmania infantum e Leishmania braziliensis em gatos (Felis catus)

Abstract Blood samples and swabs from ocular conjunctiva and mouth were obtained from 64 cats. Of 64 serum samples, 19 were positive for Leishmania antibodies by ELISA (29.80%). Eight cats were positive by PCR (12.5%) in swab samples from mouth and/or ocular mucosa. Poor kappa agreement between serological and molecular results (k = 0.16) was obtained. From five positive PCR samples one was L. braziliensis and four were L. infantum. Phylogenetic analysis performed with the five isolates of Leishmania, showed that samples of L. infantum isolated from the cats were phylogenetically close to those isolated from domestic dogs in Brazil, while the L. braziliensis is very similar to the one described in humans in Venezuela. The study demonstrated that, despite high seropositivity for Leishmania in cats living in the study region, poor agreement between serological and molecular results indicate that positive serology is not indicative of Leishmania infection in cats. Parasite DNA can be detected in ocular conjunctiva and oral swabs from cats, indicating that such samples could be used for diagnosis. Results of phylogenetic analyzes show that L. infantum circulating in Brazil is capable of infecting different hosts, demonstrating the parasite's ability to overcome the interspecies barrier.

Resumo Amostras de sangue e swabs da conjuntiva ocular e oral foram obtidas de 64 gatos. Das 64 amostras de soro, 19 foram positivas para anticorpos contra Leishmania por ELISA (29,80%). Oito gatos foram positivos por PCR (12,5%) em amostras de swab da boca e / ou mucosa ocular. Demonstrou-se baixa concordância kappa entre os resultados sorológicos e moleculares (k = 0,16). Das cinco amostras positivas para PCR, uma era L. braziliensis e quatro eram L infantum. A análise filogenética realizada com os cinco isolados de Leishmania, mostrou que amostras de L. infantum, isoladas dos gatos, eram filogeneticamente próximas às isoladas de cães domésticos do Brasil enquanto L. braziliensis era muito semelhante ao descrito em humanos na Venezuela. O estudo demonstrou que, apesar da alta soropositividade para Leishmania, em gatos que vivem na região do estudo, pouca concordância entre os resultados sorológicos e moleculares indica que a sorologia positiva não é indicativa de infecção por Leishmania em gatos. O DNA do parasita pode ser detectado na conjuntiva ocular e nas zaragatoas orais de gatos, indicando que essas amostras podem ser usadas para o diagnóstico. . Resultados de análises filogenéticas mostram que L. infantum, circulando no Brasil, é capaz de infectar diferentes hospedeiros, demonstrando a capacidade do parasita de superar a barreira interespécies.

Seroprevalence and incidence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum infection in naturally exposed domestic dogs from a rural area of São Paulo state, Brazil / Soroprevalência e incidência de infecção por Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães domésticos naturalmente expostos em uma área rural no estado de São Paulo, Brasil

Abstract Dogs are hosts of the protozoans Toxoplasma gondii, which causes an important public health disease, and Neospora caninum. Studies that have evaluated toxoplasmosis and neosporosis for prolonged periods in dog populations are rare. We analyzed infection by both parasites in a domestic dog population over three consecutive years in São Paulo state, Brazil. In the 1st, 2nd and 3rd years of collection, 181, 193 and 172 domiciles were visited, and blood samples of 331, 371 and 348 dogs were collected for antibody serology, respectively. The seroprevalence of T. gondii in each year was 27.2%, 22.5% and 43.9%, respectively, and that of N. caninum was 7.8%, 4.8% and 6.8%, respectively. The incidence rates for T. gondii in the 2nd and 3rd collections were 13.2% and 30.0%, and those for N. caninum were 3.3% and 4.4%, respectively. Positive and negative serological conversions for both agents occurred at high frequencies during the study period. This study reveals the canine population's serological profile and demonstrates the constant exposure of dogs to the investigated pathogens, indicating the need for prevention and control measures in the region.

Resumo Os cães são hospedeiros dos protozoários Toxoplasma gondii, que causam uma importante doença para a saúde pública, e Neospora caninum. Estudos que avaliam a toxoplasmose e a neosporose por períodos prolongados em populações caninas são raros. Foi analisada a infecção por esses dois parasitas em uma população de cães domésticos e domiciliados por três anos consecutivos, no Estado de São Paulo, Brasil. Nos 1º, 2º e 3º anos de coletas, 181, 193 e 172 domicílios foram visitados, nos quais foram coletadas amostras de sangue de 331, 371 e 348 cães para sorologia, respectivamente. A soroprevalência de T. gondii em cada ano foi de 27,2%, 22,5% e 43,9%, respectivamente; e a de N. caninum foi de 7,8%, 4,8% e 6,8%, respectivamente. As taxas de incidência para T. gondii, nas 2ª e 3ª coletas, foram de 13,2% e 30,0%, respectivamente; e para N. caninum, 3,3% e 4,4%, respectivamente. As conversões sorológicas positivas e negativas para ambos os agentes ocorreram em alta frequência durante o período analisado. Este estudo revela o perfil sorológico da população canina e demonstra sua constante exposição aos patógenos investigados, o que requer medidas de prevenção e controle na região.